表面上是二氧化碳被固定于丙酮酸生成草酰乙酸的反应。

　　CH₃COCOOH＋CO₂HOOCCH₂COCOOH自伍德与沃克曼（H．G．Wood与C．H．Werkman1938）在丙酸菌（Propionibacterium）发现以来，现在已知于不进行光合作用的异养动物、原生动物、微生物、尤其是不含叶绿素的植物组织里也发生这种形式的二氧化碳固定（二氧化碳暗固定）。此反应根据其后的研究，主要是丙酮酸羧化酶反应：

　　丙酮酸＋CO₂＋ATP草酰乙酸＋ADP＋P此外，也认为与苹果酸酶（EC1．1．1．40）有关：

　　丙酮酸＋CO₂＋NADPH＋H＋L－苹果酸＋NADP^＋