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提问时间 2013-01-28 21:31
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提问时间 2013-01-28 21:31
北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
本文采用Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管（货号：MS-DI5001）和Venusil® HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。
实验部分
仪器和试剂
高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。
双氰胺标准品，Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil® HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。
实验方法
提取、净化
称取1g试样于50ml具塞离心管中，加入2ml水溶解后，加乙腈定容至10ml，超声10min，8000r/min离心5min，取2ml上清液加Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管中，，涡旋0.5min，8000r/min离心5min，取上清液过0.22um滤膜，待测。
HPLC法：
色谱条件：
色谱柱：Venusil® HILIC 5μm 100Å 4.6*250mm；
流动相：A：10mmol/L乙酸铵（pH=4.0）；
B：乙腈；
A：B=10:90；
检测波长：220nm；
进样量：10µl；
柱温：30℃；
流速：1ml/min。
实验结果：
线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液；
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1µg/ml，0.5µg/ml，1.0µg/ml，2.0µg/ml，5.0µg/ml和10.0µg/ml的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2：
| 名称 | 保留时间 | 线性方程 | 相关系数 | 最低定量限（S/N=10） |
| 双氰胺 | 4.92min | Y=116.44X+3.2699 | 0.9997 | 0.1µg/ml |
检测方法稳定性考察
选用10.0µg/ml的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表3：
| 标号 | 保留时间，min | 峰面积 |
| 1 | 4.930 | 1061.7 |
| 2 | 4.933 | 1072.2 |
| 3 | 4.930 | 1064.4 |
| 4 | 4.929 | 1079.7 |
| 5 | 4.930 | 1067.3 |
| 6 | 4.934 | 1073.6 |
| RSD，% | 0.04 | 0.62 |
准确度和精密度
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表4
| 平行1，% | 平行2，% | 平行3，% | 平均值，% | RSD，% |
| 98.6 | 88.4 | 89.8 | 92.3 | 5.99 |
LC-MS/MS法：
色谱条件：
色谱柱：Venusil® HILIC 5μm 100Å 2.1*150mm；
流动相：A：0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0）
B：乙腈
A：B=10:90
进样量：10µl；
柱温：30℃；
流速：0.2 ml/min。
质谱条件
质谱仪：API 4000+；
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测；
CAD：8.00；
CUR：10.00；
GS1：60.00；
GS2：50.00；
IS：5500.00；
TEM：500.00。
| 药物名称 | 监测离子对 | DP | EP | CE | CXP |
| 双氰胺 | 85/68 | 71 | 10 | 41 | 6 |
| 85/43 | 71 | 10 | 41 | 6 |
实验结果
线性关系和检出限
准确称取双氰胺标准品50mg于50ml容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液；
分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml，50ng/ml，100ng/ml和500ng/ml的标准溶液，按照上述液质方法，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见下表6：
| 名称 | 保留时间 | 线性方程 | 相关系数 | 最低定量限（S/N=10） |
| 双氰胺 | 3.15min | Y=8777.2X+7435.9 | 0.9993 | 5ng/ml |
检测方法稳定性考察
选用50.0ng/ml的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表7：
| 标号 | 保留时间，min | 峰面积 |
| 1 | 3.29 | 382950 |
| 2 | 3.30 | 387950 |
| 3 | 3.25 | 382840 |
| 4 | 3.31 | 399820 |
| 5 | 3.30 | 378580 |
| 6 | 3.30 | 383810 |
| RSD，% | 0.65 | 1.92 |
准确度和精密度
选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表8。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响�？瞻拙换合∈秃鸵译嫦∈偷谋曜既芤海璋贩迕婊拖喽苑岫缺任廾飨员浠逝卸细梅椒ㄎ藁市вΦ挠跋臁�
| 平行1，% | 平行2，% | 平行3，% | 平均值，% | RSD，% |
| 84.6 | 80.7 | 90.2 | 85.2 | 5.61 |
图1 定性定量稳定性考察谱图（HPLC法）
图2 双氰胺0.5μg/ml标准溶液谱图（HPLC法）
图3 奶粉空白谱图（HPLC法）
图4 奶粉10μg/g空白谱图（HPLC法）
图 5 10ng/ml双氰胺标准溶液质谱图
图 6 奶粉空白质谱图
刚在网上看见的，不知道靠谱不。
大家都用过哪些方法呢？给个您亲身经历过的真实案例吧。
年底了，还让这个闹得人心惶惶啊！！
