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外周血白细胞的分离

放大字体  缩小字体 发布日期:2024-10-12  来源:上海源叶生物科技有限公司
核心提示:1.自然沉降法 人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000~1000:1,两类细胞的沉降速度不同,据此加以分离。自然沉降法是利用红细胞


1.自然沉降法 
人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000~1000:1,两类细胞的沉降速度不同,据此加以分离。自然沉降法是利用红细胞自然沉降率较快加以分离。该法简便易行,对细胞损伤少,但纯度差。
【试剂及配制】
(1) 无Ca2+、Mg2+ Hank’s液
(2) 含10%~20% 灭活小牛血清Hank’s液
【操作方法】
(1) 取静脉血2ml,放入加有抗凝剂的试管中,轻轻混匀;
(2) 将试管直立静置于室温或37℃温箱中30~60min,待红细胞自然沉降。此时可见试管中的悬液分3层,上层为淡黄色血浆,底层为红细胞,在紧贴红细胞层上有一呈灰白色的白细胞层;
(3) 用毛细管吸取位于红细胞层上面的富含白细胞的细胞悬液,移入另一试管中;
(4) 加入无Ca2+、Mg2+Hank’s液至离试管口3cm处,混匀,以水平离心机2000r/min 离心10min,弃上清,同法在洗涤两次;
(5) 沉淀细胞用适量10%~20% 灭活小牛血清的Hank’s液重悬,计数,配成所需的细胞浓度的悬液,一般常用2×106/min。
2.加速红细胞沉降法 
利用高分子量的聚合物促使红细胞凝聚成串钱状,从而加速红细胞沉降,使之与白细胞分离。常用的高分子聚合物有明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及甲基纤维素等。
【试剂及配制】
(1) 3%明胶(粘度为25泊以上):选取明胶,用生理盐水配成3%溶液,置沸水浴加热溶解,分装,高压蒸汽灭菌8磅15~20min。
(2) 6%右旋糖酐(分子量200~400KD):用生理盐水配制。
【操作方法一】
(1) 取抗凝静脉血加入等量3%明胶盐水溶液中,混匀;
(2) 将试管直立静置室温或37℃温箱中30~60min,利用明胶与红细胞的粘合作用,促使红细胞快速下沉,而白细胞留在明胶溶液中;
(3) 用毛细吸管吸取富含白细胞的上层液,移入另一试管中;
(4) 按上述自然沉降法(4)~(5)操作。
【操作方法二】
(1)取抗凝静脉血加入等量6%右旋糖酐溶液中,混匀;
(2)按操作方法一的(2)~(4)操作。

编辑:songjiajie2010

 
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