培养基是微生物、细胞成长的“生命沃土”与摇篮，由人工配制，含碳源、氮源等多种养分，能调控pH值与渗透压，营造适宜环境。在生物学研究领域，它助力科学家分离、鉴别微生物，精准计数，推动科研；基因工程实验里，为基因改造细胞供养分，助探基因奥秘。医药行业中，它用于培养致病微生物辅助诊断、筛选药物，细胞培养基还保障生物制品量产。食品行业用它检测微生物守护餐桌安全，助力发酵食品制作。培养基种类多，要求各异，下面了解几种实验室常用的培养基及其配制方法，开启微观探索之旅。
01
细菌培养“神器”：牛肉膏蛋白胨培养基
（一）成分
牛肉膏蛋白胨培养基是细菌培养的“黄金搭档”。牛肉膏提供碳源、氮源、磷酸盐与维生素，满足细菌能量需求；蛋白胨供应氮源，含多种氨基酸与生长因子助力细菌成长；NaCl调节渗透压，稳定细菌细胞内环境；琼脂粉用于制作固体培养基，为细菌搭建“成长家园”；ddH2O作溶剂，融合营养成分，成为细菌生长的“生命源泉”。
（二）配制流程
- 精确称量：依配方用电子天平精准称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl ，牛肉膏黏稠可用玻璃棒挑取、水溶后倒入，蛋白胨易潮称取要迅速，专匙专用防混杂污染。
- 充分溶解：烧杯加适量蒸馏水搅匀，小火加热、不停搅拌至药品全溶，配固体培养基此时加琼脂粉并搅拌至溶化，防琼脂糊底。
- 细致调 pH：先用精密 pH 试纸测原始值，细菌宜中性或微碱性，偏酸用 1mol/L NaOH 滴加、搅拌、测值至 7.4 - 7.6，偏碱用 HCl 调，避免过头。
- 合理分装：按需分装试管或三角瓶，液体试管装 1/4 左右，固体试管不超 1/5，三角瓶不超一半，防沾管口、瓶口。
- 严格灭菌：试管或三角瓶塞棉塞，松紧适度，放高压蒸汽灭菌锅 121℃、105kPa 灭菌 15 - 20 分钟，结束后待压力归零、稍降温取出，固体摆斜面（占试管 1/2），液体备用。
02
分子生物学“宠儿”：LB 培养基
（一）成分
在分子生物学领域，LB培养基是培养大肠杆菌的首选。其配方原理精妙：胰蛋白胨经胰酶处理，裂解为小分子多肽与氨基酸，方便大肠杆菌摄取氮源；酵母粉富含维生素 B 族、氨基酸等生长因子，助力大肠杆菌生理活动；NaCl调控渗透压，稳定细胞形态；制作固体培养基加的琼脂粉，加热液化、冷却凝固，便于分离、纯化；ddH2O作溶剂融合养分，是大肠杆菌的“生命源泉”。
（二）配制流程
- 精准称量：依配方，用高精度天平精确称取胰蛋白胨10g、酵母粉5g、NaCl 10g，称取时动作迅速，防药品吸潮、洒落混杂。
- 充分溶解：将药品倒入洁净烧杯，加适量蒸馏水，用玻璃棒匀速搅拌促溶，配固体培养基时加15 - 20g琼脂粉，小火加热搅拌至溶化透明。
- 精准调pH：大肠杆菌喜中性偏碱环境（pH约7.0 - 7.5），用精密pH试纸或pH计测pH，偏酸用1mol/L NaOH溶液逐滴调，偏碱用1mol/L HCl溶液微调至达标。
- 准确定容：溶液转至容量瓶，洗涤烧杯、玻璃棒2 - 3次，洗涤液并入，用蒸馏水定容至1L。
- 严格灭菌：配好的培养基分装至三角瓶或试管，棉塞封口，放高压蒸汽灭菌锅，121℃、103.4kPa灭菌15 - 20分钟，灭菌后待压力归零、温度稍降取出，固体趁热摆斜面（长度约试管1/2 - 2/3），液体冷却备用。
- 妥善保存：LB培养基常温避光短期保存，长期不用放4℃冰箱，防干裂、变质。
03
真菌培育“摇篮”：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基
（一）成分
马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基选材天然。用 200g 新鲜马铃薯，洗净、去皮、切块水煮，经双层纱布过滤的浸出液富含多种养分，可为真菌生长供能、助力细胞构建、推动新陈代谢。20g 葡萄糖作为速效碳源，能让真菌在生长初期快速繁殖。15 - 20g 琼脂粉制作固体培养基时可塑形，便于真菌立体生长与观察分离。ddH2O 补足至 1L，融合各成分，为真菌营造生长环境。
（二）配制流程
- 马铃薯处理：选表皮光滑、无芽眼、无病害的新鲜马铃薯，洗净去皮，切成约1cm³小块，称200g放入不锈钢锅，加适量蒸馏水浸没，小火煮20 - 30分钟至软烂。
- 浸出液制备：煮好稍冷却，用双层纱布过滤、挤压至洁净容器，滤液不足1L用蒸馏水补足。
- 成分混合：滤液倒回锅，加20g葡萄糖、15 - 20g碾碎的琼脂粉，小火加热搅拌至琼脂、葡萄糖溶化。
- pH调节：PDA培养基pH一般约5.6，适合多数真菌生长，特殊要求按需测值调节，酸用1mol/L NaOH、碱用1mol/L HCl溶液边加边搅微调。
- 分装灭菌：趁热用三角漏斗分装至试管或三角瓶，试管装1/5管高、三角瓶装不超一半容积，塞棉塞、包牛皮纸注明信息，121℃、103.4kPa灭菌15 - 20分钟，试管培养基冷至50℃制成斜面，三角瓶的摇匀冷却备用。
04
特殊需求“定制”：其他常用培养基
（一）葡萄糖糖发酵管：代谢研究好帮手
葡萄糖糖发酵管是检测细菌糖代谢能力的“得力工具”，含蛋白胨、酵母粉、氯化钠、磷酸氢二钾、葡萄糖、酚红指示剂、琼脂（用于半固体培养基），加ddH2O至 1L。在科研、医学、食品行业作用大，科研上助探究细菌糖类利用、剖析代谢途径，挖掘潜在价值；医学中可鉴别病原菌辅助诊断、制定治疗方案；食品行业能检测微生物糖代谢特性保障安全。其半固体特性有优势，细菌游动空间介于固、液培养基之间，既能展现代谢活性，又便于观察产气、产酸等代谢现象，助力精准判断实验结果。
（二）SOB 培养基：高效克隆的“助推器”
SOB培养基是分子生物学实验中的“明星产品”，由20g胰蛋白胨、5g酵母粉、0.5g NaCl、ddH2O加至1L等成分组成。在基因克隆实验里，它为感受态细胞提供充足营养，助力外源基因高效导入宿主细胞，大大提高克隆成功率，加速科研进程。蛋白质表达研究中，能满足工程菌对营养的高要求，促使蛋白大量表达，为后续蛋白功能研究、药物研发筑牢根基。培养基中的高浓度胰蛋白胨富含氨基酸与多肽，为细菌生长提供丰富氮源，促进细胞快速增殖；酵母粉中的生长因子激发细菌代谢活力，增强对外源基因的摄取与表达能力；适量NaCl维持渗透压稳定，保障细菌细胞正常生理功能，全方位为细菌生长、基因操作保驾护航。
（三）高氏 1 号培养基：放线菌的“专属家园”
高氏 1 号培养基是放线菌培养的首选，含 20g 可溶性淀粉、1g KNO₃、0.5g NaCl、0.5g K₂HPO₄·3H₂O、0.5g MgSO₄·7H₂O、0.01g FeSO₄·7H₂O 及 15 - 20g 琼脂，加 ddH2O 至 1L。在抗生素研发、土壤微生物研究领域作用大，为放线菌生长、代谢营造理想环境，助其合成抗生素、分离鉴定土壤放线菌，为新药研发、生态保护等提供依据。培养基成分作用各异，可溶性淀粉作长效碳源供能，KNO₃供氮源，多种无机盐调节酶活性、维持渗透压，保障放线菌成长。
05
筛选“利器”：培养基中的抗生素应用
（一）氨苄青霉素
氨苄青霉素是实验室常用抗生素，在细菌筛选中很关键。它溶解性好、易溶于水，母液浓度一般为 100mg/mL，称 1g 氨苄青霉素加 10mL 无菌水，搅拌溶解后小份分装，放 -20℃保存。使用时按需稀释到 50 - 100μg/mL 加入培养基，如克隆实验中，含重组质粒、有氨苄青霉素抗性基因的细菌能在含该抗生素的 LB 培养基中生长，未转化成功的受限，以此实现筛选。
（二）其他抗生素
卡那霉素易溶于水，常用10mg/mL母液浓度，称0.1g融入10mL无菌水，过滤除菌后分装，-20℃保存，工作浓度25 - 50μg/mL，常用于筛选抗性基因工程菌，在植物转基因研究中助力筛选转化植株细胞。氯霉素溶解性独特，易溶于乙醇，母液浓度34mg/mL，取0.34g用10mL无水乙醇溶解，分装小份，-20℃避光保存，遇光易分解，工作浓度25μg/mL，在微生物遗传学研究里筛选含抗性基因菌株效果显著。四环素微溶于水、易溶于酸，母液浓度10mg/mL，将0.1g四环素盐酸盐溶于10mL无菌水或稀盐酸，用铝箔包裹装液管，避光-20℃保存，工作浓度10 - 50μg/mL，用于研究细菌耐药性机制时筛选抗性菌。需注意，抗生素溶液配好后要用针头过滤器过滤除菌，确保纯净，且有保质期，要定期检查，过期及时更换，保障实验准确性与可靠性。
06
细节决定成败：培养基配制注意事项
在培养基配制过程中，诸多关键细节关乎实验成败，需实验人员倍加留意。无菌操作是重中之重。微生物无处不在，一旦培养基被杂菌污染，实验结果将毫无可信度。整个配制流程，从称量药品、溶解搅拌，到分装、灭菌，务必在无菌环境下进行。例如，使用超净工作台，开启前用紫外线照射30分钟以上，操作时酒精灯火焰周围形成无菌区，所有器具经高温灭菌或酒精消毒，严禁徒手触碰培养基内部或无菌器具接触非无菌物品，确保培养基纯净无杂菌。pH值的精准调节不容忽视。不同微生物对pH要求严苛，微小偏差就可能抑制生长或导致死亡。调节pH时，宜用精密pH试纸或pH计，边滴加酸碱溶液边搅拌，缓慢调节，避免pH值大幅波动，调好后再次确认，确保稳定在适宜范围，为微生物营造舒适的酸碱环境。原料质量把控是基础。优质原料是培养基品质保障，购买时选正规厂家，查看生产日期、保质期、成分说明等，确保原料有效成分足、杂质少。对易吸潮、变质原料，如蛋白胨、酵母粉，密封保存，现用现称；琼脂粉无结块、霉变，否则影响培养基凝固性与透明度。分装与保存同样关键。分装培养基依据实验用量与容器选择合适工具，如滴管、移液管或定量分装器，确保分装量精准，避免沾污容器外壁与瓶口。液体培养基分装高度一般试管1/4 - 1/3、三角瓶1/3 - 1/2；固体培养基考虑斜面制作或平板厚度。保存时，未灭菌培养基4℃冷藏，防变质、长菌，1 - 2天内用完；灭菌后固体培养基常温避光短期（1 - 2周）保存，长期4℃冷藏；液体培养基4℃冷藏，定期检查有无浑浊、沉淀，若有即弃。
手机版
