最常用的检验乙型肝炎病原体的试验。以前又称澳大利亚抗原或肝炎协同抗原。乙型肝炎病毒是DNA病毒。在乙肝病人血清中可发现3种形态不同的病毒颗粒。即大球形颗粒（Dane颗粒）、小球形及管状颗粒。前者为完整的乙肝病毒颗粒，含有病毒的表面抗原（HBsAg）、核心抗原、e抗原及DNA 多聚酶等；后两者的主要成分为HBsAg。HBsAg是一种含糖的脂蛋白，由6种多肽组成。有共同的抗原决定簇“a”和几种亚型抗原决定簇d、y、w、r，按不同组合构成多种亚型。我国以adr型为多见。HBsAg有免疫原性，能刺激机体产生抗体，起抵抗乙肝病毒的作用。HBsAg是乙型肝炎的一个重要诊断指标，多数急性乙型肝炎病人在疾病的潜伏期即可检出HBsAg，在急性期达高峰，以后迅速下降。慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎、肝炎后肝硬化、原发性肝癌等，也可检出HBsAg。HBsAg携带者的血清中HBsAg阳性结果持续时间可能很长，但并不表现出疾病。HBsAg的检查方法很多，有琼脂免疫扩散法、对流电泳法、反向被动血凝法（RPHA）、酶联免疫法、固相放射免疫法等。但前二者灵敏度不够，已很少用。RPHA法操作简单快速，不需特殊仪器，灵敏度高于前二者，为目前应用较多之方法，但其灵敏度与特异性仍不如酶联免疫法，故将会被酶联免疫法所取代。放射免疫法虽然灵敏、特异，但须同位素标记，试剂来源不足，不宜推广。肝炎病毒对干燥与紫外线耐力强。可用高压灭菌法或过氧乙酸浸泡等方法消毒。