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采血

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-28

材料与试剂

1.抗凝剂

(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其钠盐或钾盐,它能阻止凝血酶原转化为凝血酶,进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白,从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml,市售肝素多为100U~126U/mg。

(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一种螯合剂。用生理盐水配制成4%的溶液备用。

(3)阿氏液(Alsever液),配方如下:

枸橼酸钠(Na3C6H5O7·5H2O) 0.80g

枸橼酸 0.0325g

葡萄糖 2.05g

氯化钠 0.42g

H2O 加至 100.00ml

混匀溶解后,114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。

阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂,又含有细胞生存的营养,所以它既可做抗凝剂,又可做血细胞的保存液。

2.针头 根据不同动物和采血部位,采用不同型号的针头,用前必须灭菌或消毒。

3.采血容器 注射器或三角瓶等。

4.采血动物。


操作方法

1.采血法 各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血,猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血,家禽由翼下静脉或心脏采血,兔由心脏或耳静脉采血,犬由颈静脉或四肢静脉采血,豚鼠由心脏采血,小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。

2.抗凝 采集血液最关键的问题是抗凝,采用什么方法进行抗凝,则根据实验的要求和条件而定。最常用的方法如下:

(1)肝素抗凝:采血时,使每ml血液含15U~20U肝素即可。计算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血时,边采血边轻轻摇动,使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。

(2)EDTA抗凝:采血前,用灭菌生理盐水将EDTA配制成4%溶液,然后按预采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液体量于采血容器内。采血,并不断摇动采血容器,使之混匀。

(3)玻璃珠法:预先将适量的玻璃珠(根据采血量多少而定)清洗后,装入采血容器中,灭菌后备用。采血过程中,边采边摇采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滚动,以机械地除去纤维蛋白,使血液不能凝固。本法虽较麻烦,但对淋巴细胞的活性影响最小,且可减少血小板的混杂。

(4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液,边采边轻轻摇动采血瓶,使之混匀。用阿氏液采血,除了抗凝外,多用于红细胞的保存。一般在4℃条件下,阿氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。

 
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