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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):IgA的分离与提纯

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-27

(一)材料与试剂配制

1.DEAE52纤维素

2.0.10Mol/L ZnSO4液

ZnSO4·7H2O 2.88g

加水至1 000.00ml

3.饱和硫酸铵溶液

4.10%EDTA—Na

5.SephadexG200

6.0.01Mol/L pH7.4PB液

7.0.10Mol/L pH6.4PB液

8.血清

(二)操作方法

1.取血清加等量的0.1Mol/L ZnSO4液,调pH至7.0,室温搅拌1h,离心去沉淀。

2.于上清液中加入等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置30min或冰箱过夜。

3.10 000r/min离心10min,去上清。

4.取沉淀溶于4ml10%EDTA-Na溶液中。

5.生理盐水中透析除盐。

6.过DE52柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱蛋白(IgG)弃去。

7.换用0.1Mol/L pH6.4PB液洗脱,收集蛋白峰,即为IgA。

8.再过SephadexG200柱,洗液为0.01Mol/L pH7.4PBS(0.14Mol/L NaCl),收集洗脱液测OD280值,取第一峰即为纯化IgA。

9.透析、浓缩、鉴定。

 

 
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鏇村

 

 
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