１ 原理
中性粒细胞中的碱性磷酸酶（简称碱酶）在一定条件下能使β－甘油磷酸钠水解释出无机磷， 后者与钼酸试剂结合成磷钼酸复合物， 再以氨基萘酚磺酸还原为钼蓝而呈现蓝色，用光电比色法求得所释放的无机磷含量，表示酶的活性。
２ 试剂
ａ．葡聚糖：分子量２０万，用生理盐水配制成２％溶液，在冰箱中可保存一个月。
�。猓�β－甘油磷酸钠溶液（０．０２６Ｍ）：称取β－甘油磷酸钠溶于碳酸—重碳酸盐缓冲溶液，将ｐＨ调至９．９，液面盖一层石油醚，在冰箱内保存。
�。悖妓幔靥妓嵫位撼逡海�
�。烈骸〕迫∥匏妓崮疲玻保玻�，溶于重蒸馏水１００ｍｌ，配成０．２Ｍ无水碳酸钠溶液。
�。乱骸〕迫√妓崆饽疲保叮福�，溶于重蒸馏水１００ｍｌ，配成０．２Ｍ碳酸氢钠溶液。
�。烈海保埃埃恚煊耄乱海保埃埃恚旎旌希又卣袅笏叮埃埃恚�，ｐＨ为９．９。
�。洌硭兀河蒙硌嗡涑桑玻ト芤骸�
�。澹然救芤海ǎ埃埃担停河弥卣袅笏涑�。
ｆ．三氯乙酸溶液：用重蒸馏水配成５０％及５％二种浓度。
ｇ．钼酸铵溶液：称取钼酸铵１２．５０ｇ，溶于重蒸馏水１００ｍｌ，加１０Ｍ硫酸１５０ｍｌ，再加重蒸馏水到５００ｍｌ。
�。瑁埃玻担グ被练踊撬崛芤海撼迫“被练踊撬幔埃埃叮玻担纭⒀橇蛩崆饽疲保常常�、亚硫酸钠０．２５ｇ，于研钵中磨成细粉，加重蒸馏水到２５ｍｌ，过滤后保存于冰箱内。用时稀释一倍。
�。椋曜剂状⒈敢海亢辽藁祝保恚纾骸〕迫「稍锖阒氐姆治龃苛姿岫饧兀玻保梗罚保缰糜谌萘科恐校又卣袅笏粒担埃埃恚�，加氯仿２滴，在冰箱内保存。
ｊ．肝素：用生理盐水配成１％溶液。
３实验方法
�。常薄“紫赴掷�
自耳垂或手指取血０．１５ｍｌ，置于预先准备好的含１滴肝素和０．３０ｍｌ葡聚糖溶液的微量试管中，用手振摇混匀，静置１０分钟。待红细胞沉降界面清晰时，小心吸出上层悬浮液，置于小离心管中，加入２倍生理盐水，摇匀后离心（２５００转／分钟）８分钟。取出上清液弃去，保留沉淀。再向有沉淀的离心管加生理盐水２ｍｌ，混匀，再离心８分钟。重复２次，弃去上清液，管中留下液体约０．１５ｍｌ，与沉淀混匀，即为白细胞悬浮液， 作白细胞计数２～４次，取其
平均值。 此白细胞悬浮液供酶活性测定之用。如不能立即测定，需放置冰箱内，
但必须在当天测定。
�。常病“紫赴蠲富钚缘牟舛�
取一小试管， 加入β—甘油磷酸钠 ０．８５ｍｌ ， 皂素 ０．０５ｍｌ，
氯化镁０．０２ｍｌ，于３７℃水浴中预热５分钟，然后准确加入白细胞悬浮液０．０５ｍｌ，混匀， 继续保温６０分钟，到时立即加入５０％三氯乙酸０．１５
ｍｌ使反应终止， 以２５００转／分离心１０分钟，除去沉淀。
每个样品都需作对照管测定，对照管所加内容物同上，仅白细胞悬浮液须在保温后加５０％三氯乙酸后加入。
分别取样品和对照管上清液０．８０ｍｌ，各加入钼酸铵试剂０．１５ｍｌ，氨基萘酚磺酸溶液０．１０ｍｌ，重蒸馏水１．４５ｍｌ，显色２０分钟，用分光光度计测定光密度（ 所用波长为６６０ｎｍ、比色杯厚１０ｍｍ ），分别读取样品管、对照管的光密度。每管重复读数两次，取其平均值。
３．３ 磷标准曲线的制定
取标准磷储备液， 用５％三氯乙酸稀释成不同浓度的标准磷应用液， 浓度分别为：１．０，３．０，５．０，７．５，１０．０ｍｇ／１。然后取试管５支，分别在每一试管加入１．０ｍｌ上述标准磷应用液之一种， 以及钼酸铵０．１５
ｍｌ， 氨基萘酚磺酸０．１０ｍｌ，重蒸馏水１．２５ｍｌ，按上法显色，读取
各管的光密度，绘制标准曲线图。
３．４ 白细胞分类计数
在取血分离白细胞的同时，取１滴血作涂片，瑞氏染色，按常规分类计数嗜中性白细胞的百分比。
�。常怠〖扑惴椒�
白细胞碱酶活性用单位表示，以每十亿个中性白细胞在３７℃条件下，１小时释放出１ｍｇ无机磷为一个单位。计算公式如下：
酶活性（单位）＝｛〔ｐｉ（样）—ｐｉ（对）〕×１００００×１．４０｝÷（Ｗ·Ｖ·Ｎ）
式中：ｐｉ（样）——样品管无机磷，μｇ；
�。穑椋ǘ裕�——对照管无机磷，μｇ；
�。�——白细胞悬液的白细胞数，个／立方毫米；
�。�——酶反应所加入白细胞悬液的量，ｍｌ；
�。�——嗜中性白细胞，％。
注：为减少操作误差，提高结果准确性，也可自静脉采血１．５ｍｌ，按常量法进行操作。详见《卫生研究》５（６）：４８１，１９７６。
４ 注意事项
�。幔紫赴罕匦氤浞忠≡龋挥τ芯奂南赴�。白细胞计数要准确，一般应计数２～４次，取平均值。
ｂ．碱酶活性测定中，白细胞悬液的加入量要准确，吸取时注意摇匀。
ｃ．碱酶反应保温时间（６０分钟）要准确。
�。洌陨从Σ挥Τ鱿殖恋�。
ｅ．用分光光度计读数时，样品管与对照管都应重复两次。