本规程旨在为微生物实验室操作提供一个标准化规程；

二、适用范围：

微生物实验室；

三、责任人：

实验室、微生物检测员；

四、安全注意事项：

严格遵循无菌操作，防止微生物污染;操作人员进入微生物实验室应先关掉紫外灯。

五、微生物实验室标准化操作规程：

1.微生物实验室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%，超净台洁净度应达到100级。

2.微生物实验室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

4.微生物实验室应备有工作浓度的消毒液(75％的酒精)。

5.微生物实验室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证微生物实验室的洁净度符合要求。

6.需要带入微生物实验室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

7.工作人员进入微生物实验室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(用75%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入微生物实验室进行操作。

8.微生物实验室使用前必须打开微生物实验室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理微生物实验室，再用紫外灯辐照灭菌30分钟。

9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用75%的酒精棉球消毒外表面。

10.每次操作过程中，均应做空白对照，以检查无菌操作的可靠性。

11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

13.带有菌液的吸管，试管，培养皿于高压蒸汽灭菌锅121℃保持20min后取出清洗。

14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用75%酒精溶液覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。

15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。

16.微生物实验室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15mL，放至凝固后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3-5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30-35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对微生物实验室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。

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