培养基倾注的适宜温度大约为45℃-50℃。可以用手心和手背的感觉来大致判断温度，手心感觉不烫，而手背感觉烫手时，温度大概就是50℃左右。温度过高会导致凝固时间延长，且皿盖上会有大量冷凝水，不利于后续实验；温度过低则可能导致倒板过程中瓶中培养基部分凝固。

二、静置时间

培养基灭菌后应放置在水浴或烘箱中保温，使用前拿出直接倒板。培养基的静置时间不宜过长，一般不超过4小时，以避免琼脂少量凝固。

三、平板准备

倒皿前，平皿应预热保持在35℃-40℃的温度。如果需要表面接种，有冷凝水的平板表面容易产生蔓延菌落。这时可放在有对流的无菌净化台中吹干培养基表面，但不能过度干燥，否则培养过程中平板容易开裂。

四、倾注量与混合

平板倾注量一般在18-20mL左右。如果培养时间超过48小时或培养温度高于40℃，为防止水分过量蒸发导致平板开裂，倾注量一般为25mL左右。倾注时尽量贴着平皿壁缓慢倒入，将气泡留在瓶子底部。如果平板中有少量气泡，可以把气泡轻摇到平板壁上，这样不会影响结果观察。另外，每个平板中加入融化后的琼脂培养基时，要迅速往复摇动和转圈晃动5-15次，使培养基与接种物充分混合。

五、避免污染

在整个操作过程中，需要注意避免污染。使用前需将装有培养基的瓶子或试管弄松，然后放在滚水或蒸汽浴里进行溶解，要小心避免培养基过热变质。已消毒培养皿的数量要比所测样品的数量多一个，用作空白对照

六、培养

待平板冷却后翻转并置于适当的温度下培养。倒平板后，可以打开皿盖，让其在超净台中凝固5分钟后再关闭皿盖，倒置放置备用；也可以采用一个接一个地倒置培养皿的方式，直到全部凝固后再倒置备用，这样可以有效地减少皿盖上的水蒸气产生。