（一）、浸泡

    新瓶使用前应先用自来水简单刷洗，然后用稀盐酸溶液（5%）浸泡过夜；培养后的玻璃器皿用后要立即浸入清水中；注意：让水能完全进入瓶皿中，不应留有气泡。

   （二）、刷洗

浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂洗涤（宜选用软毛刷和优质的洗涤剂，如高级洗衣粉或洗洁精），绝对不能使用含沙粒的去污粉！洗刷时特别注意洗刷瓶角部位。

   （三）、浸泡

器皿要充满清洁液，勿留气泡。浸泡时间不应少于6小时；一般应浸泡过夜。

清洗液配方：

【强液】    重铬酸钾                   63g

            浓硫酸                    1000ml

            蒸馏水                     200L

【次强液】  重铬酸钾                   120g

            浓硫酸                     200ml

            蒸馏水                     1000ml

【弱液】    重铬酸钾                   100g

            浓硫酸                     100ml

            蒸馏水                     100ml

矽酸钠洗液；

使用比较安全，可以代替清洗液，但价格较贵。

先配制成100Χ贮存液：矽酸钾80g，偏磷酸钠9g，加热溶解在1000ml蒸馏水中。使用时，用蒸馏水100倍稀释。

   （四）、冲洗

刷洗和浸酸后都必须用水充分冲洗，使之不留任何残迹。冲洗宜用洗涤装置，以保证冲洗效果，如用手工操作，每瓶都得用水灌满，倒掉，重复十次以上，最后再用蒸馏水漂洗2～3次，凉干备用。

    二、胶塞的清洗

    新购置的胶塞先用自来水冲洗干净后，再做常规处理。

常规洗涤方法：

浸泡

↓

2%NaOH煮沸（10～20分钟）

↓

自来水冲洗

↓

1%稀盐酸浸泡（30分钟）

↓

自来水冲洗

↓

蒸馏水清洗（2～3次）

↓

凉干备用

 

    三、塑料器皿的清洗

目前我国培养使用的塑料器皿主要是从国外购置的，是一种无毒并已经消毒过灭菌密封包装的商品。用时，只要打开包装即可，是一次使用性物品。必要时，用后经无菌处理后 ，尚可反复使用2～3次，但不宜过多。再用时仍然需要清洗和灭菌处理。塑料器皿质地软，不宜用毛刷刷洗，造成清洗困难。为此使用中一是防止划痕，二是用后要立即浸入水中，严防附着物干结；如残留有附着物，可用脱脂棉清拭掉，用流水冲洗干净，凉干、再用2%NaOH液浸泡过夜，用自来水充分冲洗，然后 用5%盐酸溶液浸泡30分钟，最后用自来水冲洗和蒸馏水漂洗干净，凉干后备用。

 

紫外线直接照射法很方便，效果好，是目前各实验室常用的消毒法。

【适用范围】空气、操作台表面和一些不能使用其它方法进行消毒的培养器皿（如塑料培养皿、培养板等）

【要求】（1）培养室的紫外线灯应距地面2.5米，使每平方厘米有0.06微瓦能量的照射，才能发生有效的消毒作用。（2）由于各种细菌对紫外线的敏感性不同，所用照射时间和剂量也不同。

【缺点】（1）产生臭氧，污染空气，对身体有害；（2）射线照射不到的部位起不到消毒作用，故消毒时，物品不宜相互遮挡。

【注意】  有人习惯于边照射边进行实验操作，这样不好，一是紫外线对细胞、试剂和培养液都有不良影响，二是对人体皮肤也有伤害。

二、湿热消毒

       湿热消毒即高压蒸汽消毒，是最有效的一种方法。

       【适用范围】布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿及某些培养用液。

       【要求】

              培养用液、橡胶制品                 10磅10分钟

              布类、玻璃制品、金属器械等         15磅20分钟

三、滤过消毒

   【适用范围】  大多数培养用液，如人工合成培养液、血清、酶溶液等（这些在高温下会发生变性，失去其功能，必须采用滤过法除菌。

   【常用滤器】  Zeiss滤器、微孔滤膜滤器及各种不同规格的一次性滤器。常用孔径0.22um滤膜过滤一般用液即可。

   【注意】

        （1）滤膜用后丢弃，滤器清洗也比较方便，先用毛刷蘸洗涤剂刷洗干净，用自来水冲洗后，再用蒸馏水冲洗，凉干即可；

        （2）用前再装上一张新的滤膜；

        （3）消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都用纸包装好，以保证消毒时的效果；

        （4）消毒后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧；

        （5）滤过少量液体时，用一种能安装在注射器上的小滤器，使用相同的滤膜，滤过时把滤过物装入注射器针管内，压出过滤物注入无菌容器中即。