www成人免费视频_91视频合集_久久久999久久久_91字幕网_91漂亮少妇露脸在线播放_77久久

食品伙伴网服务号
当前位置: 首页 » 仪器设备 » 分子生物学仪器 » 正文

RNA提取及注意事项(一)

放大字体  缩小字体 发布日期:2024-01-30  来源:网络
核心提示:【目的】研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低经常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分

【目的】
研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化
RNA。RNA质量的高低经常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。
【主要试剂】
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破碎细胞,抑制细胞释放出的核酸酶。

1. Trizol试剂含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。

2. RNase污染的主要来源是操作过程中手和空气中的浮沉,注重配带手套,样品尽可能盖严。

3. 细胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全会降低最后得率,因为一部分RNA会残留在未裂解的细胞中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质(结缔组织和骨除外)。在清洗和裂解细胞时最好在低温下操作,防止在操作过程中释放的内源RNase降解了RNA。

4. 酵母和一些细菌由于细胞壁的特别结构,可以加入Trizol试剂同时加入无RNase的玻璃珠并剧烈振荡,使细胞裂解充分。

2-8℃ 避光保存一年。
【预备工作】
RNA酶(Rnase)是导致RNA降解最主要的物质。此酶非常稳定,在一些极端的条件下只可暂时失活,但限制因素去除后又迅速恢复活性。常规高温高压灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的Rnase完全失活。

1.它广泛存在于人的皮肤上,因此制备RNA时必须戴手套

2.RNase的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用以DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部,可基本达到要求。

3. 塑料制品、玻璃和金属物品的处理

塑料制品:尽量使用一次性无菌塑料制品。已标明RNase-free的塑料制品,如没有开封使用过,通常不必再处理。

处理的步骤如下:

(1)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入DEPC使其终浓度为0.05%~0.1%(DEPC-H2O)。(DEPC二乙基焦碳酸酯为活性很强的剧毒物,须在通风橱中小心使用)

(2)将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC-H2O,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中,在通风柜中37℃ 或室温下处理过夜。

(3)将DEPC-H2O小心倒入废液瓶中,将装有DEPC- H2O 处理过的塑料制品的容器以铝箔封口,高温高压蒸汽灭菌至少30分钟。

(4)灭菌塑料制品烘烤干燥,置洁净处备用。

(5)玻璃和金属物品250℃烘烤3小时以上。

编辑:songjiajie2010

 
分享:
[ 网刊订阅 ]  [ 仪器设备搜索 ]  [ ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 关闭窗口 ] [ 返回顶部 ]
 

 
 
推荐图文
推荐仪器设备
点击排行
 
 
Processed in 0.095 second(s), 17 queries, Memory 0.92 M
主站蜘蛛池模板: 久久久久久九九精品久小说 | 曰韩亚洲av人人夜夜澡人人爽 | 成人影院欧美大片免费看 | 亚洲国产综合无码一区 | 波多野结衣av无码久久一区 | 人人妻人人澡人人爽欧美一区 | 亚洲四虎永久在线播放 | 二区国产 | 亚洲狠狠色丁香婷婷综合 | 人妻老妇乱子伦精品无码专区 | 精品一二三区久久aaa片 | 国产精品a在线观看香蕉 | 国产偷窥熟女精品视频大全 | 日本一级片免费观看 | 高清中文字幕视频在线播 | 国产成人8x视频网站入口 | 亚洲国产精品无码久久久 | 亚洲日韩精品a∨片无码加勒比 | 欧美中文字幕第一页 | 久草网视频在线 | 男女特黄一级全版视频 | 永久黄网站免费视频性色 | 特一级毛片 | 一级做a爰片久久毛片美女 一级做a爰片久久毛片免费 | 在线播放一区二区三区 | 日韩人妻无码精品-专区 | 羞羞草影院 | 在线观看免费人成视频 | 精品视频免费在线观看 | 色先锋资源久久综合5566 | 一级片免费网站 | 日本欧美一区二区三区在线观看 | 真实的国产乱xxxx在线 | 成人中文乱幕日产无线码 | 久久99精品国产麻豆不卡 | 中国免费一级毛片 | 中文字幕日产无码 | 国产成人精品视频频 | 亚洲av无码专区在线播放中文 | 色窝窝免费一区二区三区 | 国产精品人妻一区二区三区四 |