www成人免费视频_91视频合集_久久久999久久久_91字幕网_91漂亮少妇露脸在线播放_77久久

VIP标识 上网做生意,首选VIP会员| 设为首页| 加入桌面| | 手机版| RSS订阅
食品伙伴网服务号
 

玻片PCR

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-07-01
在聚丙烯管中可以对多种含膜板材料进行PCR,而在显微玻片上用组织细胞涂片或切片直接进行DNA扩增的方法就称为玻片PCR(Slide-PCR)。
  先将细胞涂片或呈单层细胞,然后用甲醇/醋酸(3:1,V/V)、Carnoy溶液、无水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5~15min。用蒸馏水冲洗,干燥,直接使用或保存于-20℃备用。在玻片上划20mm×28mm为免疫组化反应区。加入30μl PCR反应混合液,其中含10mmol/L Tris pH8.3,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,200μmol/l dNTPs,100nmol/L引物,0.01%(V/V)明胶,0.2% BSA, 2.5u/100μl Taq酶。然后盖上22mm×40mm的盖玻片,边缘用石蜡油封好。把玻片放入PCR热循环仪金属块上,使金属块与样品呈最大程度接触,同在聚丙烯管中一样,进行30~40个循环。对于较短的扩增片段在后期循环中变性温度可降低。反应后,将致冷玻片放在氯仿中除去大部分石蜡油,但不取出盖玻片,用一个尖镊子轻轻拈起盖玻片一角,在相对的一角中PCR反应混合液呈半月形液面,用移液器回收。一般可回收25μl混合液,将反应产物进行琼脂糖电泳或用套式PCR引物按标准PCR进行重新扩增。片上扩增物可做原位杂交显示。
  在Slide-PCR中,需0.1%~1%的BSA。加入BSA可以保证扩增结果,但效率不一定很高。明胶(至少0.0001%),对扩增1kb左右的靶DNA十分重要。但对小片段扩增结果影响不大。不同的样品提取方法或固定法对Slide-PCR都可行。
  Silde-PCR的机理可能是在起始变性过程中一部分DNA从细胞中洗提出来,然后在细胞和玻片的水相中进行PCR。用地高辛标记的人全基因组DNA探针杂交表明在起始循环中DNA极微量,而30个循环后很丰富。常规细胞染色表明只有少量的形态改变。
  Silde-PCR对于玻片上的细胞样品提供了一种较好的方法,而不必再把这些样品从玻片上括下来,使操作简便,污染减少。本方法对于原样品量极微且需病史追踪保存的(如子宫颈涂片或涂片)具有实用价值。
 
[ 网刊订阅 ]  [ 食品专题搜索 ]  [ ]  [ 告诉好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 关闭窗口 ] [ 返回顶部 ]

 

 
推荐图文
推荐食品专题
点击排行
 
 
Processed in 0.469 second(s), 858 queries, Memory 2.69 M
主站蜘蛛池模板: 亚洲成av人片在线观看www | 久久美女精品 | 久久毛片基地 | 熟妇人妻系列av无码一区二区 | 嫩草影院地址一地址二 | 色一情一伦一区二区三 | 国产精品美女久久久久网站 | 色小说亚洲 | 四虎影视在线看免费 720p | 免费观看欧美一级高清 | a一级一级 | 伊人亚洲综合青草青草久热 | 欧洲亚洲一区 | 久久久久琪琪免费影院 | 欧美亚洲另类久久综合 | 色婷婷综合久久久 | 四川少妇被弄到高潮 | 奶头又大又白喷奶水av | 欧美色欧美亚洲另类二区 | 亚洲午夜精品久久久久久成年 | 国产av无码专区亚洲a∨毛片 | 粗大的内捧猛烈进出视频 | 国产线视频精品免费观看视频 | 日本黄色三级视频 | 夜夜躁狠狠躁日日躁2002 | 亚洲高清在线观看视频 | 中文字幕一区二区三区有限公司 | 日韩成人在线网站 | 免费播放国产性色生活片 | 国产97式| 嫩草一二三的区别 | 竹菊一区二区 | 色在线免费视频 | 欧美黑人添添高潮a片www | 飘花国产午夜精品不卡 | 国产在线观看精品一区二区三区 | 18岁日韩内射颜射午夜久久成人 | 毛片免费看 | 日本www在线播放 | 韩国免费a级在线观看观 | 国产又色又爽无遮挡免费 |