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腹水型肿瘤悬液的制备

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-27

1 抽取腹水
  选择接种后7-10d健康较好的动物,颈椎脱臼,固定于蜡板上,腹部皮肤消毒后,剪开并剥去腹部皮肤,用空针穿过腹部肌肉,抽吸腹水,放入无菌容器内,置冰块保存。若用几只动物供瘤时,应将腹水混合。另取小量腹水,置于加有肝素的干试管内,作为观察细胞形态及细胞计数用。将空针中剩余的腹水,滴一滴于载玻片上,推片,瑞氏染色,镜下进行细胞分类计数,其中瘤细胞数应≥95%。
  抽出之腹水应为乳白色之浓稠液体,若为黄色或有大量红细胞数应弃去。
  2 细胞计数
  取置于肝素管内的细胞。用生理盐水稀释10倍及100倍;取稀释液0.9mL,加台盼蓝(0.2%台盼蓝生理盐水液)0.1mL,混匀。用白细胞计数法计瘤细胞总数。同时计算受感染的死细胞数。因瘤细胞死后,细胞膜的通透性改变,细胞可被台盼蓝染成蓝色。
  3 接种
  腹水用无菌含葡萄糖的平衡盐水(如Hanks氏液、Gey氏液、洛氏液、Earle氏液等)稀释至适当的浓度,作腹腔注射,每鼠注入0.1-0.2mL。整个操作应在60min内完成。
  一般在试验结束后次日称体重,逐日记录。对照组动物通常在2-3周内全部死光,个别存活时间太长者需剔除,但各组亦应相应地剔除一只。如试验期间对照组动物于7d内死亡≥20%,表示试验失败。如对照组内20%动物存活4周以上,实验亦应作废,受试物组观察时间一般为60d(生存超过此时限者,仍按60d计算)。分别记录对照组和受试物组的平均生存时间。  
白血病株的接种腹水型白血病如L1210及P388的接种同腹水型肿瘤接种法。L615小白鼠白血病的接种则按下述方法进行。取L615白血病小白鼠(约接种后第6d),颈椎脱臼,在无菌条件下,剪取脾脏一小块(约米粒大小),放置玻璃组织匀浆器内,加少量无菌生理盐水,制成细胞悬液,并稀释至8-9mL,取一定量加0.2%台盼蓝缓冲液,计每毫升悬液的活细胞数(台盼蓝终浓度为0.02%)。根据活细胞数值适当稀释悬液将细胞数调整至4×107/mL,接种于小鼠皮下,每鼠接种细胞悬液0.1-0.2mL。

 

 
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