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葡萄组织培养育苗

放大字体  缩小字体 发布日期:2005-05-16
 一、葡萄嫩梢采集与消毒
     将大树或扦插苗长出5—7片叶的嫩梢,取5—10厘米长,去掉幼叶。用自来水冲洗3—5分钟,在70%酒精中浸泡30—40秒钟,用蒸馏水冲洗2—3次,再放入0.5%氯化汞溶液中消毒7一10分钟,最后用无菌水冲洗5—6次后备用。
 
二、培养基制作与筛选 
    (一)茎尖培养   方1   1/2ms培养基+6—苄基嘌呤(6—ba)0.5一lppm个荼乙酸(naa)0.01ppm+水解乳蛋白(lh)100ppm+蔗糖2%+琼脂0.6%配制,氢离子浓度调到1585纳摩/升[ph5.8)。在98.06千帕的压力下,高压灭菌20分钟,冷凉待用。山东酿酒葡萄研究所用此方对白羽、红香蕉、白友谊、雷司令等品种茎尖培养成活率达83.5%以上。
    方2   1/2ms培养基+赤霉素(ga)0.1ppm+吲哚乙酸(1ba)0.59pm+6-节基嘻吟lppm+激动素(kt)0.5ppm+硫酸腺嘌呤(ade)4ppm+琼脂0.6%+蔗糖0.2%的培养基,对康拜尔芽变(康太)成活较好(辽宁省农科院植保所)。
 
    (二)茎叶分化培养    方1    1/2ms培养基+赤霉素1ppm+吲哚丁酸0.5ppm+6-节基膘吟1ppm+蔗糖2%+琼脂0.6%,氢离子浓度调到1000纳摩/升(ph6.0)。在98.06千帕高压下灭菌20分钟后备用。辽宁省农业科学院植保所对贝达、红富土、黑奥林、巨峰品种族种成活率达90%以上。
    方2    用b5大量元素培养基+ms培养基其他元素+吲哚乙酸(1aa)0.01—0.1ppm+6-苄基嘌呤0.02—0.59pm+腺嘌呤(a)2;ppm或水解乳蛋白1000ppm+蔗糖2%—3%+琼脂0.7%,氢离子浓度630.9—1585纳摩/升(ph5.8—6.2),配好后装入三角瓶中,用两层硫酸纸封口,在98.06—117.67千帕的高压锅中灭菌20分钟,冷凉待用。河南省园艺所用此配方对京早晶品种接种成活效果较好。
 
    (三)幼根分化培养    方1     用bs大量元素培养基+蔗糖4%+吲哚乙酸1ppm+6-苄基嘌呤0.08ppm+琼脂7%,氢离子浓度1000纳摩/升(ph6),经高压灭菌20分钟,冷凉备用。辽宁省农业科学院植保所用此配方对红富士、黑奥林、巨峰等品种茎尖培养的单芽段,插入灭菌后的三角瓶培养基中,芽痕高于培养基面3.5毫米,每瓶插入1—3个茎段,插后在黑暗中培养48小时;再转入间歇光照(两支40瓦日光灯下,每天光照10小时)培养,温度保持在23—28℃,20天后幼根平均长分别为99.0,86.3,78.0毫米。
    方2     用1/2ms培养基+蔗糖4%+吲哚乙酸0.4ppm+6-苄基嘌呤0.06ppm+琼脂7%,氢离子浓度1000纳摩/升(ph6),经过高压灭菌后接种贝达、红宫土、黑奥林、臣蜂,20天后幼根平均长分别为94.0,36.5,16.8,50.8毫米。此培养基对贝达繁殖有较好效果(辽宁省农科院植保所)。
 
    三、接种(茎段试管培养)    在超净工作台上,将彻底消毒过的备用嫩枝剪截2厘米核的单芽茎段,将其下部插入灭菌后的试管培养基中,芽痕高于培养基面3—5毫米,每管插1—3个茎段,在黑暗处培养48小时,再转入间歇光照(两支40瓦日光灯下,每天照10个小时)培养,温度保持在25—28℃,以后光照时间每天可延长12—14小时,光照强度为2000—2500勒。
 
    四、继代培养    将试管苗剪成带叶单芽段,不必消毒,插人培养基中,一般10一15天开始生根,30—35天可长成5.6片叶的小苗,在适宜条件下,1年可繁殖数万株试管苗。
 
    五、炼苗移栽    试管苗长成后移到温室或塑料大绷里,在自然光照下炼苗。要求温度在20—25℃,经两周后将试管塞揭开,使之接受自然光照、温度、湿度锻炼4—5天。用镊子夹叶柄将小苗从培养基中取出,洗去培养基残留物,直接栽入温室或大棚中的小拱棚里的砂壤土或粗砂里,浇透底水。棚内湿度保持在90%左右。10厘米下的地温应稳定在15℃左右,光照为4000—5000勒。15—20天后见幼叶变绿时,即可移植到大田,成活率达80%以上。如棚内温度过高,要通风和盖苇帘遮荫降温,喷洒凉水,提高棚内空气湿度和土壤湿度,以保持炼壮苗的适宜条件。
 
 
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